mito-tracker green fm

       希望我能够为您提供一些关于mito-tracker green fm的信息和知识。如果您有任何疑问或需要进一步的解释，请随时告诉我。

1.western blot能检测线粒体膜电位变化吗

western blot能检测线粒体膜电位变化吗

       我专门搞过一段时间线粒体功能检测，主要有以下流式细胞术检测方法供你参考：

       1 以NAO标记线粒体表面心肌磷脂含量，评价线粒体质量

       2 以 JC－1检测线粒体膜电势

       3 以DiOC6（3） /PI双染检测线粒体膜电势和死亡细胞

       4 以Mitotracker Green FM标记线粒体质量

       Rodamin123和其他Radamin衍生染料不推荐，原因是荧光焠灭过快，而且对线粒体特异性染色程度较差，质膜系统基本都染

       细胞内溶酶体和线粒体的荧光活体染色

       Lyso-Tracker Red是一种溶酶体(lysosome)红色荧光探针，可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。Lyso-Tracker Red为采用Molecular Probes公司的DND 99进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针，可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中，从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。中性红(Neutral?Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色，但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。

       Mito-Tracker Green是一种线粒体(mitochondria)绿色荧光探针，可以用于活细胞线粒体特异性荧光染色。?Mito-Tracker?Green为采用Molecular?Probes公司的carbocyanine进行了荧光标记的一种Mito-Tracker，分子量为671.88，可以用作线粒体特异性的荧光探针。和rhodamine?123或JC-1相比，Mito-Tracker Green对于线粒体的染色不依赖于线粒体膜电位。

       Lyso-Tracker Red工作液的配制：

       a. 取少量Lyso-Tracker Red按照1:13333-1:20000的比例加入到细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中，使最终浓度为50-75nM。例如取1μl Lyso-Tracker Red加入到20ml13.33ml细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中。

       2. 溶酶体的荧光标记：

       a. 去除细胞培养液，加入步骤1配制好的并28℃预温育的Lyso-Tracker Red染色工作液，与细胞28℃共孵育30分钟。

       b. 去除Lyso-Tracker Red染色工作液，加入新鲜的细胞培养液。

       c. 随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到溶酶体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果欠佳，可以提高Lyso-Tracker Red染色工作液中Lyso-Tracker Red的浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。

       2. Mito-Tracker Green工作液的配制：

       a. 取少量1mM Mito-Tracker Green储存液按照1:5000-1:50000的比例加入到细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中，使最终浓度为20-200nM。例如取1μl Mito-Tracker Green加入到50ml或5ml细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中。混匀后即为Mito-Tracker Green工作液。HBSS with Ca2+ & Mg2+ (C0219) 可以向碧云天订购。

       b. Mito-Tracker Green工作液使用前需28℃预温育。

       注：工作液中Mito-Tracker Green的浓度可以根据实际情况进行适当调整。为降低背景，在染色效果可以接受的范围内，建议尽量使用较低浓度的Mito-Tracker Green。

       3. 线粒体的荧光标记：

       a. 去除细胞培养液，加入步骤2配制好的并28℃预温育的Mito-Tracker Green染色工作液，与细胞28℃共孵育15-45分钟。

       b. 去除Mito-Tracker Green染色工作液，加入28℃预温育的新鲜细胞培养液。

       c. 随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到线粒体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果欠佳，可以提高Mito-Tracker Green染色工作液中Mito-Tracker Green的浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。

       今天关于“mito-tracker green fm”的讨论就到这里了。希望通过今天的讲解，您能对这个主题有更深入的理解。如果您有任何问题或需要进一步的信息，请随时告诉我。我将竭诚为您服务。